福彩网

  • <tr id='Zczzfj'><strong id='Zczzfj'></strong><small id='Zczzfj'></small><button id='Zczzfj'></button><li id='Zczzfj'><noscript id='Zczzfj'><big id='Zczzfj'></big><dt id='Zczzfj'></dt></noscript></li></tr><ol id='Zczzfj'><option id='Zczzfj'><table id='Zczzfj'><blockquote id='Zczzfj'><tbody id='Zczzfj'></tbody></blockquote></table></option></ol><u id='Zczzfj'></u><kbd id='Zczzfj'><kbd id='Zczzfj'></kbd></kbd>

    <code id='Zczzfj'><strong id='Zczzfj'></strong></code>

    <fieldset id='Zczzfj'></fieldset>
          <span id='Zczzfj'></span>

              <ins id='Zczzfj'></ins>
              <acronym id='Zczzfj'><em id='Zczzfj'></em><td id='Zczzfj'><div id='Zczzfj'></div></td></acronym><address id='Zczzfj'><big id='Zczzfj'><big id='Zczzfj'></big><legend id='Zczzfj'></legend></big></address>

              <i id='Zczzfj'><div id='Zczzfj'><ins id='Zczzfj'></ins></div></i>
              <i id='Zczzfj'></i>
            1. <dl id='Zczzfj'></dl>
              1. <blockquote id='Zczzfj'><q id='Zczzfj'><noscript id='Zczzfj'></noscript><dt id='Zczzfj'></dt></q></blockquote><noframes id='Zczzfj'><i id='Zczzfj'></i>

                新闻资讯

                News ↓↓↓
                【半宙】一文读懂如何建设PCR实验室
                2020-05-18 17:21 来源:

                4月26日,国家卫健委举办全国视频会议,明确提出“所有县区级以上疾控机构、二级以上综合医院要抓紧进行改造,在短时间内形成核酸检测能力”。各地的公立机构检测能力不能满足需求只是暂时的,独立医学实验室在充实检测力量的同时,发挥自己丰富的检验管理运营理念,以及区域化覆盖的经验优势,融入到“国家队”核酸检测能力的建设中,顺势而为,乘势而上。随着各地都在∩建立PCR实验室,本文从硬件基础的角度,梳理了PCR实验室建设的几◥个关键点,独立医学实验室可以运用丰富的运营经验,进行建设指导、人员梯队建立、质控体系搭建、区域化服务支持等。

                如何建设PCR实验室

                与PCR实验室建设相关的指导文件主要有四份:


                《医疗机构管理条例》


                《医疗机构临床实验室管理办︻法》


                《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》


                《医疗机构临床基因扩增实验室管理办法》

                要求临床PCR实验室,不但在实验室设置及仪器设备等硬件上要满足开展临床检验的条件,而且要求实验室在日常工作要有ξ文件化的工作√程序。

                下面就在PCR实验室建设过程中的几个关键控制点进行阐述:

                01
                建立PCR实验室质量管理体系

                根据实验室的具体情况编写质量体系文件,《质量手册》、《程序文件》、《作业指●导书》,并保证管理体系运行有效。管理体系的特点是应有明确的目的、规范的管理、有效╳的制约、高效的机制、能自我ξ发展的整体。建立完善的SOP文件,对完成各项质量活动的方法作出规定,每个SOP都应对一个或一组相互关系的活动进行描述。每个SOP文件应说明该项质量各环节的输入、转换和输出所需的文件、物资、人员、记录以及它们与有关活动的接口关系。明确每个环节转换过程中各项因素的要求,即由谁做、做什么、做到什么程序、达到什么要▓求,如何控制、形成什么记录和报告,以及相应的审批手续。规定在质量活动中需要注意的例外或特殊情况的纠正措施。SOP应简练、明确和易懂并且工作人员熟练掌握和严格↘遵守。

                02
                PCR实验室的相关设置

                要完成一组PCR实验,通常需要经过试剂配制、样品处理、核酸扩增㊣和产物分析4个实验过程。这4个实验过程的实》验用房应相邻布置,组成一个独立的PCR实验区。标准的PCR实验区包括:试剂准备♂区、标←本制备区、扩增区、产物分析区、各区配套的缓冲区及公共走廊。

                PCR实验室整体平面布局

                某医院PCR实验室平面布局↑如图1所示,整个区域有一个公用走廊,每个独立实验区设有专门的缓冲区。通过压差控制,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染,并且降低扩增产物对人员和环境的污染。

                图表1、某医院PCR实验室平面图

                试剂准备区

                该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送☆至该区,不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存』在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。试剂准备区配备有2~8°C冰箱和-80°C冰箱,计算冷负荷时,需要将它们计算在内。房间的面积宜控制在15m2~20m2。本区的ξ 压力梯度要求为:相对正压状态,以防止外界含核酸气溶胶的空气进∑入,造成污染。

                标本制备区

                该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成标本制备区配备有2~8°C冰箱和-20°C冰箱,计算冷负荷时,需要将它们计算在内。在标本制备区,还需要配备生物安全柜,用于进行提取核酸的操作。为避免提取的核酸在柜内反复循环,造成标本之间的交叉污染,出现假阳性结果,该区域配备的生物安全柜必须是B2型的。生物安全柜工作区垂直气流全部来自实验室,排风经过高效过滤器过滤后直接排至室外,不允许回到安全柜和实验室中。根据经验,如果实验室内配备生物安全柜,每配备一台,实验室的面积增加10m2;标本制备区的面积宜在25m2~30m2之间。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻卐近区进入本区的气溶胶污染。

                扩增室

                该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外,已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入※和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。

                在巢式PCR测定中,通常在第一轮扩增后必须打开反应管,因此巢式扩增有较高的污染危险性,第二次☆加样必须在本区内进行。

                扩增室主要配卐备PCR实验室的核心仪器PCR仪,本文实例中使用了ABI7500和ABI9700两种PCR仪。

                在实验室建造过程中,需要给PCR仪配备专Ψ 门的UPS电源,以保证其正常工作。该区面积控制在15m2~20m2。

                本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶⊙所致的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。建议采用5~10Pa压差,在控制上比※较容易实现。

                产物分析区

                该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测,此区域可不设。

                在ζ 室内配备通风橱,保证房间内的相对负压,空气【从室外流向室内。该区面积控制在15m2~20m2。

                本区是最主要的扩增产物污染来源,因此对本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散○至其它区域。建议采用5~10Pa压差,在控制上比较容易实现。

                03
                正负压区域缓冲室的设置

                根据压力梯度的要求,试剂配制室和样︽品处理室为相对正压,扩增室和产物分析室为相对负压,要求正压的区域和要求负〖压的区域的缓冲室内的压力设计大不相同。正压缓冲室符合一般正压洁净室的缓冲原则,主要是防止室外环境空气中的气溶胶进¤入室内。正压缓冲室的布置如图2所示。

                图表2、正压缓冲室的布置图


                负压缓冲室则是要求缓冲室对核酸扩▆增室及产物分析区保持正压,对缓冲室外也保持正压(主要是满☆足室内净化需要,如室内无洁净要求,此处可以为0压)。负◣压缓冲室的布置如图3所示。

                图表3、负压缓冲室的布置图①

                04
                污染的预防与控制

                PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中,常见的有以下几种№污染类型:扩增产物的污染;天然基因♂组DNA的污染;试剂的污染以及标本间的污染。因此要避免污染,首先应是预防,而不是※排除。

                • 工作区域的严格划分,各个实验区域要有明显的标记(如醒目的门牌或不同的地面颜色等),以避免各个不同实验区域设备物品、试剂↑等发生混淆。

                • 合理的系统设置,合理的空】调通风系统设置,尽量采用全送全排的空调系统;严格的气流压力控制,保证不同的实验区内不同的压力要求。

                • 规范々的操作,临床基因扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训,在实验操作过程中,操作者必须戴手◤套,并经常更换。清洁工作及时■、正确。实验工作结束后,必须立即对本区进行清洁。



                Copyright ?http://www.tubienraiz.com/半宙◣集团官方网站 All rights reserved. 粤ICP备15098956号