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                新闻资讯

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                微生物实验操作中常见注意事项汇总!
                2019-03-04 11:11 来源:

                微生物实验容易被污染,所以,对实验环境、设备和人员都需要很高的要求。在实验过程中需要注意的事项也很多,小析姐就其中的几点和大家进行学习。

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                菌操作要求 

                1. 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。      

                2. 进行接种食品↘样品时,必须穿专用的工作服、帽及拖鞋,应放在无菌室缓卐冲间, 工作前经紫外线消毒后使用。       

                3. 接种食⌒ 品样品时,应在进无菌室前用肥皂洗手,然后用75%酒精棉球将手擦干净。      

                4. 进行接种所用㊣ 的吸管,平皿及培养基等必须经消毒灭菌,打开包装未使用完的器皿,不能放▽置后再使用,金属用★具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。        

                5. 从包装△中取出吸管时,吸管尖部不能触及外露部位,使用吸管接种于试管或平皿时,吸管尖不得触及试管或平皿边。       

                6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操〓作,接种细菌或样品时,吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。       

                7. 接种环和针在接种细菌前应经火▲焰烧灼全部金属ζ 丝,必要时还要烧到环和针与杆的连接处,接种结核菌和烈性菌的接种环应【在沸水中◎煮沸5min,再经火焰烧灼。

                8. 吸管吸取菌液或样品时,应用相应的橡○皮头吸取,不得直接用口吸。   

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                不同型号的接种针和接种环


                菌间使用要求

                1、无菌间通向外面的▓窗户应为双层玻璃,并要密封,不得随意打开,并设有与无菌间大小√相应的缓冲间及推拉门,另设有0.5-0.7平方米的小窗,以备进入无菌间后传递物品。

                2、无菌间内应保持清洁,工作后用2%-3%煤酚☆皂溶液消毒,擦拭※工作台面,不得存放与实验无关的物品。       

                3、无菌间使用前后应将门关紧, 打开紫外灯,如采用室内悬吊紫外灯消▆毒时,需30W紫外灯,距离在1.0m处,照射时间不少于30min,使用■紫外灯,应注意不得直接在紫外线下操作,以免引起损伤,灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭,除去上面灰尘和①油垢,以减少紫外线穿透的影响。       

                4、处理和接种食品标本时,进入无菌间操作,不得随意出入,如需要传ω 递物品,可通过小窗传递。       

                5、在无菌间内如需要安装空调时,则应〒有过滤装置。

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                毒灭菌要求

                微生物检测用的玻璃器皿、金属用具◎及培养基、被污染和接种的培养物等,必须经灭菌后方能使用。灭菌方式有干热︾和湿热高压蒸气锅灭菌方法和间歇灭菌方法


                1、灭菌前准备


                (1)所有需〗要灭菌的物品首先应清洗晾干,玻璃器皿如♀吸管、平皿用纸包装严密,如用ζ 金属筒应将上面通气孔打开。

                (2)装々培养基的三角瓶塞,用纸包好,试管盖好盖,注射器须将管芯抽出,用纱布包『好。

                2、装放

                (1)干热灭菌◤器:装放物品不可过挤,且不能接触箱的■四壁。

                (2)大型高压蒸气锅::放置灭菌物品分别包扎好,直接放入消毒筒内,物品之间︽不能 过挤。

                3、设备检查

                (1)检查门的开关是ㄨ否灵活,橡皮圈有无损坏,是否平整。

                (2)检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位,关好「门和盖,通蒸气←或加热后,观察是式高压锅或立式压▽力蒸气灭菌器的使用〇应按下列步骤进行:

                ①手提式高压锅在主体内加入3L清水,立式高压锅加水16L(重▅复使用时应将水 量补足,水变混浊需更换).

                ②手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中(无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用)。

                ③盖好顶盖拧紧╲,勿使漏气;置灭菌器于火源上加↓热,立式压力锅通上电源,并打开顶盖上的排气阀放了冷气▲(水沸腾后〒排气10-15min)。

                ④关闭排气阀,使蒸气压上升到→规定要求,并维持规定『时间(按灭菌物品性质与有关情况而定)。

                ⑤达到规定时间后,对需干燥』的物品,立即打开排气◥阀排出蒸气,待压力恢复到零时,自然冷却至 60℃后开盖取物,如为※液体物品,不要打开排气阀,而应立︾即将锅去除热源,待自∮然冷却,压力恢复至零,温度降到60℃以下再开盖取物,以防突然减压液体剧烈沸腾或∏容器爆破。    

                (3)卧式压力锅蒸气灭菌器的使用ㄨ按下列步骤进行:

                ①关紧锅门,打开进气阀,将蒸气引入夹层进行Ψ 预热,夹层内冷空气经阻气器自动排出。 

                ② 夹层达到预定温度后,打开锅室进气◥阀,将蒸气引入锅室,锅室内冷空气经锅室阻气器自动排出。

                ③待锅室达到规定的压力与温度时,调节进↓气阀,使保持ぷ恒定。

                ④自然或人工降温至60℃再开门取物,不得使※用快速排出蒸气法,以防突然降压,液体剧烈沸腾或容器爆破。

                ⑤使用自动程序控』制式压力蒸气灭菌器,在放好物品关紧门后,应根据物品类别按 动【相应开关,以便@ 按要求程序自动进行灭菌,灭菌时必须利用附设仪表记录温度与时间以备查,操作要求应严格按照厂家说明书进行。

                4、灭菌温度与时◇间

                压力蒸气灭菌锅灭菌温度与◣时间见下表:

                QQ图片20190304111059.png

                (1)干热灭菌器灭菌温度160℃,1.5-2h。

                (2)压力蒸气灭菌 锅灭菌温度与时间。

                QQ图片20190304111117.png

                间接灭菌方法

                1、灭菌方法系利用不加压力〖的蒸气灭菌,某些物质经高压蒸气灭菌︻容易破坏,可用此法灭菌。

                (1)将欲灭菌物品置于锅内,盖上顶盖,打开排水口,使器内余水排尽。

                (2)关闭排水口,打开进气△门,根据需要消毒10~20min。     

                (3)灭菌完毕关闭进气门,取出物品待冷至室温温度,放入37℃温箱过夜,次日仍按上述方法消毒,如此三次,即可达▂到灭菌目的。

                2、煮沸消毒:可用煮锅或煮沸消毒器,水沸腾后再煮5~15 min,也◆可在水中加入2%石炭酸煮沸5 min,加入0.02%甲醛,80℃煮60 min均可达到灭菌目的, 但选用 煮沸消毒的增消剂时, 应注意对物品的∴腐蚀性。


                菌后处理

                灭菌后物品,按正常情况已属无菌,从灭菌器中取出应仔细检查放◥置,以免再度污染。     

                1.物品取出,随即检查包装的完整性,若有破坏或棉塞脱掉,不可作为无菌物◥品使用。    

                2.取出的▓物品,如为包装有明显的水浸者,不可作为无菌※物品使用。

                3.培养基或试剂等,应检查是否符合达到灭菌后的色泽或状态,未达到者【应废弃。

                4.启闭式容器,在取出时应将筛孔关☆闭。

                5.取出的物品掉落在地或误放不洁这处,或沾有水液,均视∮为受到污染,不可作为无菌物品使用。

                6.取出的√合格灭菌物品,应存放于贮藏室或防尘柜内,严禁与未灭菌物品混放。

                7.凡属合格物品,应标有灭菌日期及有效期■限。

                8.每批灭菌处理完成◢后,记录灭菌♀品名、数量、温度、时间、操作者。


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